材料

• Spark Cyto 600 全自动实时活细胞成像检测系统，包含湿度盒 （Tecan）

• D300e 微量加样器 （Tecan）

• Real Time-Glo™ MT 细胞活力试剂盒（Promega）

• HeLa 细胞 （ATCC）

• Jurkat 细胞 （RIKEN BRC）

• Greiner 384 孔白色透明底聚苯乙烯细胞培养微孔板（cat #：781098）

• Greiner 384孔白色聚苯乙烯细胞培养微孔板（cat #：781075）

• 台盼蓝，二甲基亚砜

方法

• 设定Spark Cyto 细胞培养条件: 37 °C ，5 % CO2

• 将MT细胞活力底物、NanoLuc®酶和细胞培养基孵育至37℃

• 用台盼蓝染色HeLa或Jurkat细胞并计算活细胞数

• 将细胞悬浮液稀释至25或125个活细胞/­l，并以40­l/孔（1000或5000个细胞/孔）的浓度将其接种在384孔板中，在37℃的CO2培养箱中过夜

说明

• 通过单独的实验提前确定合适的细胞接种密度

• 细胞接种可以选择单通道或多通道手持加样器或自动化解决方案，如Tecan Fluent® 自动化工作站

• 空孔使用无菌水填充，减少样品蒸发

• 准备5X RealTime-Glo试剂用于在培养基中稀释MT细胞活力底物和NanoLuc 酶

• 每个孔中加入10­l 5X Real Time-Glo试剂，并轻轻混合。

• 在37 °C和5% CO2的细胞培养箱中孵育30-60分钟。注：无菌水和小型湿度盒提前预热至37°C

• 使用D300e T8+分配盒移液溶解在DMSO中的化合物，剂量范围从0到1­M，并使每个孔中DMSO的总体积归一化。注：快速移液以减小温度波动

• 在Spark Cyto中每1小时监测1次发光信号，持续24-48小时（详见实验方法）。注：若在检测过程中需要向湿度盒中添加无菌水，可提前优化实验方法。

• 导出数据并使用Python 3进行数据分析。注：数据分析可以选择Excel等其他软件

结果和讨论

        通过明场成像24小时观察细胞汇合度，并使用预置的程序进行评估。化合物A给药24小时后，细胞汇合度受到抑制，并呈现剂量依赖性，表明化合物A抑制了细胞增殖（图1）。

      (A) 使用Spark Cyto获得的HeLa 细胞明场图像 (B) 细胞汇合度随时间的变化 (C) 化合物A给药24小时后的归一化值（N = 4，mean ± 95 % CI）

        使用基于发光的方法检测细胞活力。在0小时的发光信号定义为阴性对照（图2A），24小时内呈现明显的剂量效应（图2B）。与图1的结果抑制，化合物A降低了细胞活力，并呈现剂量依赖性。Spark Cyto的细胞汇合度和细胞活力数据可用于评估药物疗效。

     同时检测了悬浮细胞Jurkat的细胞活力，实验结果显示化合物B抑制了细胞增殖或诱导细胞死亡，并呈现剂量依赖性（图3）。

结论

        D300e和Spark Cyto的成功联用，为药物对HeLa和Jurkat细胞的活力和生长的影响提供了综合数据，证明了该装置适用于贴壁或悬浮细胞的药物分析。两种不同检测方法的同时使用，突显出Spark Cyto在多重实验分析中的实力。

（文章来源：hmez.huimeihealth.com.cn/hm/scrm/scrmmobile/eda/1654774561053659136）